Bathar
Pasgan lorgaidh Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR airson 2019-nCoV
Cleachdadh ris a bheil dùil
Tha am pasgan seo air a chleachdadh airson lorg càileachdail de coronavirus ùr (2019-nCoV) a’ cleachdadh swaban amhach, swaban nasopharyngeal, lionn lavage bronchoalveolar, sputum. fianais airson breithneachadh agus làimhseachadh clionaigeach. Thathas a’ moladh mion-sgrùdadh coileanta den t-suidheachadh an co-bhonn ri taisbeanaidhean clionaigeach an euslaintich agus deuchainnean obair-lann eile.
Prionnsabal sgrùdaidh
Tha am pasgan stèidhichte air teicneòlas RT-PCR aon-cheum.Gu dearbh, chaidh na ginean coronavirus ùr 2019 (2019-nCoV) ORF1ab agus N a thaghadh mar na roinnean targaid leudachaidh.Tha primers sònraichte agus probes flùraiseach (tha probes gine N air an ainmeachadh le FAM agus tha probes ORF1ab air an ainmeachadh le HEX) air an dealbhadh gus RNA coronavirus seòrsa ùr 2019 a lorg ann an sampallan.Tha an uidheamachd cuideachd a’ toirt a-steach siostam lorg smachd taobh a-staigh endogenous (probe gine smachd a-staigh air a chomharrachadh le CY5) gus sùil a chumail air pròiseas cruinneachadh sampall, leudachadh RNA agus PCR, agus mar sin a’ lughdachadh toraidhean àicheil meallta.
Prìomh phàirtean
| Co-phàirtean | Toirt（48T / Kit） |
| Fuasgladh freagairt RT-PCR | 96µl |
| nCOV primer TaqMan probemixture （ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene） | 864µl |
| Smachd àicheil | 1500µl |
| nCOV Contro adhartach （l ORF1ab N Gene） | 1500µl |
Ath-bheachdan fhèin: ath-bheachdan às-tharraing no glanaidh RNA.Smachd àicheil / dearbhach: Is e an smachd adhartach RNA anns a bheil a’ chriomag targaid, agus is e uisge gun searbhag niuclasach an smachd àicheil.Rè an cleachdadh, bu chòir dhaibh pàirt a ghabhail ann an às-tharraing agus bu chòir beachdachadh orra gabhaltach.Bu chòir an làimhseachadh agus faighinn cuidhteas iad a rèir riaghailtean iomchaidh.
Is e an gine iomraidh a-staigh an gine RnaseP daonna.
Suidheachadh stòraidh agus ceann-latha crìochnachaidh
-20 ± 5 ℃, seachain reothadh agus leaghadh barrachd air 5 tursan, dligheach airson 6 mìosan.
Uidheam iomchaidh
Le FAM / HEX / CY5 agus ionnstramaid PCR fluorescent ioma-seanail eile.
Feumalachdan sònraichte
Seòrsaichean sampaill iomchaidh: swaban amhach, swaban nasopharyngeal, lionn lavage bronchoalveolar, sputum.
Cruinneachadh 2.Specimen (teicnigeach aseptic)
Swab pharyngeal: Sguab na tonsils agus balla pharyngeal posterior le dà swab aig an aon àm, agus an uairsin bog an ceann swab ann an tiùb deuchainn anns a bheil am fuasgladh samplachaidh
Sputum: Às deidh casadaich dhomhainn a bhith aig an euslainteach, cruinnich sputum casadaich ann an tiùb deuchainn caip sgriubha anns a bheil am fuasgladh samplachaidh;lionn lavage bronchoalveolar: samplachadh le proifeiseantaich meidigeach.3.Storage agus còmhdhail de shamhlaichean
Bu chòir sampallan airson aonaranachd bhìoras agus deuchainn RNA a dhearbhadh cho luath ‘s a ghabhas.Faodar sampallan a lorgar taobh a-staigh 24 uairean a stòradh aig 4 ℃;an fheadhainn nach gabh a lorg taobh a-staigh 24
bu chòir uairean a stòradh aig -70 ℃ no gu h-ìosal (mura h-eil suidheachadh stòraidh de -70 ℃, bu chòir dhaibh a bhith
air a stòradh airson ùine aig -20 ℃ fuaradair).Bu chòir sampallan a bhith a’ seachnadh reothadh is leaghadh aig àm còmhdhail.Bu chòir sampallan a chuir chun obair-lann cho luath ‘s a ghabhas às deidh an cruinneachadh.Ma tha feum air sampallan a ghiùlan thar astaran fada, thathas a’ moladh stòradh deighe tioram.
Dòighean deuchainn
1 giullachd sampaill agus às-tharraing RNA (raon giollachd sampall)
Thathas a’ moladh 200μl de shampall liùlach a ghabhail airson às-tharraing RNA.Airson ceumannan às-tharraing co-cheangailte, thoir sùil air stiùireadh innealan às-tharraing RNA malairteach.An dà chuid àicheil agus àicheil
bha smachdan anns a’ ghoireas seo an sàs ann an às-tharraing.
Ullachadh reagent 2 PCR (raon ullachaidh reagent)
2.1 Thoir air falbh a h-uile pàirt bhon phasgan agus leaghadh agus measgachadh aig teòthachd an t-seòmair.Centrifuge aig 8,000 rpm airson beagan dhiog mus tèid a chleachdadh;obraich a-mach an àireamh de dh’ ath-bheachdan a tha a dhìth, agus tha an siostam freagairt air ullachadh mar a chithear sa chlàr a leanas:
| Co-phàirtean | N seirbheis (siostam 25µl) |
| nCOV primer TaqMan probemixture | 18 µl × N |
| Fuasgladh freagairt RT-PCR | 2 µl × N |
| * N = an àireamh de shamhlaichean a chaidh a dhearbhadh + 1 (smachd àicheil) + 1 (nCOVsmachd adhartach) | |
2.2 Às deidh na pàirtean a mheasgachadh gu mionaideach, cuir centrifuge airson ùine ghoirid gus leigeil leis a h-uile leaghan air balla an tiùba tuiteam gu bonn an tiùba, agus an uairsin cuir an siostam leudachaidh 20 µl a-steach don phìob PCR.
3 Samplachadh (raon ullachaidh sampaill)
Cuir ris 5 μl de na smachdan àicheil agus dearbhach às deidh an toirt a-mach.Tha an RNA den sampall a thèid a dhearbhadh air a chur ris an tiùb freagairt PCR.
Gabh an tiùb gu teann agus cuir centrifuge aig 8,000 rpm airson beagan dhiog mus gluais thu e chun raon lorg leudachaidh.
Meudachadh 4 PCR (raon lorgaidh leudaichte)
4.1 Cuir an tiùb freagairt ann an cealla sampall an ionnstramaid, agus suidhich na paramadairean mar a leanas:
| àrd-ùrlar | Rothaireachd àireamh | Teòthachd(°C) | Uair | cruinneachadhlàrach |
| Air aistar-sgrìobhadh | 1 | 42 | 10 mionaidean | - |
| Ro-dhearbhadhn | 1 | 95 | 1 mhionaid | - |
| Rothaireachd | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30sg | cruinneachadh dàta |
Taghadh sianal lorg ionnstramaid: Tagh an sianal FAM, HEX, CY5 airson an comharra flùraiseach.Airson iomradh fluorescent GUN, feuch nach tagh thu ROX.
5 Mion-sgrùdadh toraidh (Thoir sùil air an stiùireadh deuchainneach airson gach ionnstramaid airson suidheachadh)
Às deidh an ath-bhualadh, sàbhail na toraidhean.Às deidh mion-sgrùdadh, atharraich an luach tòiseachaidh, an luach crìochnachaidh, agus luach stairsneach na bun-loidhne a rèir an ìomhaigh (faodaidh an neach-cleachdaidh atharrachadh a rèir an t-suidheachaidh fhìor, faodar an luach tòiseachaidh a shuidheachadh gu 3 ~ 15, faodar an luach crìochnachaidh a shuidheachadh gu 5 ~ 20, rèiteachadh) anns a’ ghraf logarithmach Aig stairsneach na h-uinneige, tha an loidhne stairsnich anns an ìre logarithmach, agus tha lùb leudachaidh an smachd àicheil na loidhne dhìreach no nas ìsle na loidhne na stairsnich).
6 Smachd meud （Tha smachd modh-obrach air a ghabhail a-steach san deuchainn） Smachd àicheil: Gun lùb leudachaidh follaiseach airson seanalan lorg FAM, HEX, CY5n
Smachd adhartach COV: lùb leudachaidh follaiseach de shianalan lorg FAM agus HEX, luach Ct≤32, ach gun lùb leudachaidh de shianal CY5;
Feumar na riatanasan gu h-àrd a choileanadh aig an aon àm san aon deuchainn;air neo, tha an deuchainn neo-dhligheach agus feumar a-rithist.
7 Co-dhùnadh air toraidhean.
7.1 Mura h-eil lùb leudachaidh no luach Ct> 40 anns na seanailean FAM agus HEX den sampall deuchainn, agus gu bheil lùb leudachaidh anns an t-sianal CY5, faodar a bhreithneachadh nach eil coronavirus ùr 2019 ann (2019-nCoV) RNA anns an sampall;
.2 Ma tha lùban leudachaidh follaiseach aig an sampall deuchainn anns na seanailean FAM agus HEX, agus gur e luach Ct ≤40, faodar a bhreithneachadh gu bheil an sampall deimhinneach airson an coronavirus ùr 2019 (2019-nCoV).
7.3 Ma tha lùb leudachaidh soilleir aig an sampall deuchainn a-mhàin ann an aon seanal de FAM no HEX, agus gur e luach Ct ≤40, agus nach eil lùb leudachaidh anns an t-sianal eile, feumar na toraidhean ath-dhearbhadh.Ma tha toraidhean an ath-dheuchainn cunbhalach, faodar a mheas gu bheil an sampall deimhinneach airson an tè ùr
coronavirus 2019 (2019-nCoV).Ma tha toradh an ath-dheuchainn àicheil, faodar a bhreithneachadh gu bheil an sampall àicheil airson coronavirus ùr 2019 (2019-nCoV).
Luach breithneachadh adhartach
Tha an dòigh lùbte ROC air a chleachdadh gus luach iomraidh CT a’ phiseag a dhearbhadh agus is e luach iomraidh smachd a-staigh 40.
Mìneachadh air toraidhean deuchainn
1.Bu chòir deuchainn a dhèanamh air gach deuchainn airson smachdan àicheil agus dearbhach.Chan urrainnear toraidhean deuchainn a dhearbhadh ach nuair a choinnicheas smachdan ri riatanasan smachd càileachd
2.Nuair a tha na seanalan lorg FAM agus HEX deimhinneach, faodaidh an toradh bhon t-sianal CY5 (sianal smachd a-staigh) a bhith àicheil air sgàth farpais siostam.
3.Nuair a tha toradh an in-smachd àicheil, ma tha na seanailean lorgaidh FAM agus HEX aig an tiùb deuchainn cuideachd àicheil, , tha e a’ ciallachadh gu bheil an siostam ciorramach no gu bheil an obrachadh ceàrr, tha an deuchainn neo-dhligheach.Mar sin, feumar na sampallan ath-dhearbhadh.
