Bratach-thoraidhean

Toraidhean

Pasgan lorgaidh Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR airson 2019-nCoV

Còd Bathar:

Ainm an nì: SARS-Cov-2-RT-PCR

Geàrr-chunntas: Tha an inneal seo air a chleachdadh airson lorg càileachdail a dhèanamh air coronavirus ùr (2019-nCoV) le bhith a’ cleachdadh swaban amhaich, swaban nasopharyngeal, lionn lavage bronchoalveolar, sputum. Chan eil toradh lorg an toraidh seo ach airson fiosrachadh clionaigeach, agus cha bu chòir a chleachdadh mar an aon fhianais airson breithneachadh agus làimhseachadh clionaigeach. Thathar a’ moladh mion-sgrùdadh coileanta air an t-suidheachadh còmhla ri taisbeanaidhean clionaigeach an euslaintich agus deuchainnean obair-lann eile.

Stòradh: -20±5℃, seachain reothadh is leaghadh a-rithist is a-rithist barrachd air 5 tursan, dligheach airson 6 mìosan.

Ceann-latha crìochnachaidh: 12 mìosan às dèidh saothrachadh


Mion-fhiosrachadh Toraidh

Tagaichean Bathar

Cleachdadh ris a bheil dùil

Tha an inneal seo air a chleachdadh airson lorg càileachdail a dhèanamh air coronavirus ùr (2019-nCoV) le bhith a’ cleachdadh swaban amhaich, swaban nasopharyngeal, lionn lavage bronchoalveolar, sputum. Chan eil toradh lorg an toraidh seo ach airson fiosrachadh clionaigeach, agus cha bu chòir a chleachdadh mar an aon fhianais airson breithneachadh agus làimhseachadh clionaigeach. Thathar a’ moladh mion-sgrùdadh coileanta air an t-suidheachadh còmhla ri taisbeanaidhean clionaigeach an euslaintich agus deuchainnean obair-lann eile.

Prionnsabal sgrùdaidh

Tha an inneal stèidhichte air teicneòlas RT-PCR aon-cheum. Gu dearbh, chaidh ginean ORF1ab agus N a’ choròna-bhìorais ùr 2019 (2019-nCoV) a thaghadh mar na roinnean targaid iomadachaidh. Tha prìmearan sònraichte agus proban fluorescent (tha proban gine N air an comharrachadh le FAM agus tha proban ORF1ab air an comharrachadh le HEX) air an dealbhadh gus RNA coronavirus den t-seòrsa ùr 2019 a lorg ann an sampallan. Tha siostam lorg smachd a-staigh endogenous (probe gine smachd a-staigh air a chomharrachadh le CY5) anns a’ inneal cuideachd gus sùil a chumail air pròiseas cruinneachadh shampallan, RNA agus iomadachadh PCR, agus mar sin a’ lughdachadh thoraidhean àicheil meallta.

Prìomh phàirtean

Co-phàirtean Meud(48T/Pasgan
Fuasgladh ath-bhualadh RT-PCR 96µl
nCOV primer TaqMan probemixture (ORF1ab, N Gene, RnaseP Gene) 864µl
Smachd àicheil 1500µl
nCOV Contro adhartach (l ORF1ab N Gene) 1500µl

Ath-bheachdan fhèin: às-tharraing RNA no ath-bheachdan glanaidh. Smachd àicheil/deimhinneach: Is e RNA anns a bheil am pìos targaid an smachd deimhinneach, agus is e uisge gun searbhag niùclasach an smachd àicheil. Rè an cleachdadh, bu chòir dhaibh pàirt a ghabhail anns an às-tharraing agus bu chòir beachdachadh orra mar ghalaran. Bu chòir an làimhseachadh agus an toirt air falbh a rèir nan riaghailtean buntainneach.

Is e an gine iomraidh a-staigh an gine RnaseP daonna.

Cumhaichean stòraidh agus ceann-latha crìochnachaidh

-20±5℃, seachain reothadh is leaghadh a-rithist is a-rithist barrachd air 5 tursan, dligheach airson 6 mìosan.

Ionnsramaid iomchaidh

Le FAM / HEX / CY5 agus ionnsramaid PCR fluorescent ioma-sianal eile.

Riatanasan sampall

1. Seòrsachan sampall iomchaidh: swaban amhaich, swaban nasopharyngeal, lionn lavage bronchoalveolar, sputum.

2. Cruinneachadh shampaill (dòigh-obrach aseptic)

Suab pharyngeal: Sguab na tonsail agus balla deiridh a’ pharyngeal le dà suab aig an aon àm, an uairsin cuir ceann an t-suab ann an tiùb deuchainn anns a bheil am fuasgladh samplachaidh.

Sputum: Às dèidh don euslainteach casadaich dhomhainn a bhith aige, cruinnich an sputum a tha air a chasadaich ann an tiùb deuchainn le caip sgriubha anns a bheil am fuasgladh samplachaidh; lionn lavage bronchoalveolar: Samplachadh le proifeiseantaich meidigeach. 3. Stòradh agus còmhdhail shamhlaichean

Bu chòir sampallan airson aonaranachd bhìoras agus deuchainn RNA a dhearbhadh cho luath ‘s a ghabhas. Faodar sampallan a lorgar taobh a-staigh 24 uairean a stòradh aig 4℃; an fheadhainn nach gabh a lorg taobh a-staigh 24…

bu chòir uairean a thìde a stòradh aig -70℃ no nas ìsle (mura h-eil suidheachadh stòraidh de -70℃ ann, bu chòir an stòradh

air a stòradh airson ùine aig fuaradair -20℃). Bu chòir sampallan a sheachnadh bho bhith gan reothadh is gan leaghadh a-rithist is a-rithist rè an còmhdhail. Bu chòir sampallan a chur chun obair-lann cho luath ‘s a ghabhas às dèidh an cruinneachadh. Ma dh’ fheumar sampallan a ghiùlan thar astaran fada, thathar a’ moladh stòradh deigh thioram.

Modhan Deuchainn

1 Giullachd shampallan agus às-tharraing RNA (raon giullachd shampallan)

Thathar a’ moladh 200μl de shampall leaghaidh a ghabhail airson RNA a thoirt a-mach. Airson ceumannan co-cheangailte ri toirt a-mach, thoir sùil air stiùiridhean innealan toirt a-mach RNA malairteach. An dà chuid an fheadhainn àicheil agus an fheadhainn àicheil

Bha smachdan sa phasgan seo an sàs anns an às-tharraing.

2 Ullachadh ath-ghnìomhaiche PCR (raon ullachaidh ath-ghnìomhaiche)

2.1 Thoir a h-uile pàirt a-mach às a’ phacaid agus leagh is measgaich aig teòthachd an t-seòmair. Cuir sa mheadhan-chonnspaid aig 8,000 rpm airson beagan dhiog mus tèid a chleachdadh; obraich a-mach an ìre riatanach de luchd-reagent, agus ullaichear an siostam freagairt mar a chithear sa chlàr a leanas:

Co-phàirtean N seirbheis (siostam 25µl)
nCOV primer TaqMan probemixture 18 µl × N
Fuasgladh ath-bhualadh RT-PCR 2 µl × N
*N = àireamh nan sampallan a chaidh a dhearbhadh + 1 (smachd àicheil) + 1 (nCOVsmachd adhartach)

2.2 Às dèidh dhut na pàirtean a mheasgachadh gu mionaideach, cuir an inneal-sgaoilidh san fhrigeradair airson ùine ghoirid gus leigeil leis a’ leaghan gu lèir air balla an tiùba tuiteam gu bonn an tiùba, agus an uairsin cuir an siostam iomadachaidh 20 µl a-steach don tiùb PCR.

3 Samplachadh (raon ullachaidh sampallan)

Cuir 5μl de na smachdan àicheil is deimhinneach ris an dèidh an às-tharraing. Cuirtear RNA an t-sampall a tha ri dhearbhadh ris an tiùb ath-bhualadh PCR.

Cuir caip teann air an tiùb agus cuir sa cheirfeutair e aig 8,000 rpm airson beagan dhiog mus gluais thu e chun raon lorgaidh leudachaidh.

4 Leudachadh PCR (raon lorg leudaichte)

4.1 Cuir an tiùb ath-bhualaidh ann an cealla sampall an ionnstramaid, agus suidhich na paramadairean mar a leanas:

àrd-ùrlar

Cearcall

àireamh

Teòthachd(°C) Ùine cruinneachadhlàrach
Cùl-taictar-sgrìobhadh 1 42 10 mionaidean -
Ro-dhì-nàdarrachadhn 1 95 1 mionaid -
 Cearcall  45 95 15s -
60 30an cruinneachadh dàta

Taghadh seanail lorg ionnstramaid: Tagh an seanail FAM, HEX, CY5 airson an t-soidhne fluorescence. Airson comharra fluorescence NONE, na tagh ROX.

5 Mion-sgrùdadh thoraidhean (Thoir sùil air stiùireadh deuchainneach gach ionnstramaid airson suidheachadh)

Às dèidh an ath-bhualaidh, sàbhail na toraidhean. Às dèidh an anailis, atharraich an luach tòiseachaidh, an luach crìochnachaidh, agus luach stairsneach na bun-loidhne a rèir an ìomhaigh (faodaidh an neach-cleachdaidh atharrachadh a rèir an t-suidheachaidh fhìor, faodar an luach tòiseachaidh a shuidheachadh gu 3 ~ 15, faodar an luach crìochnachaidh a shuidheachadh gu 5 ~ 20, atharrachadh) anns a’ ghraf logaritmach. Aig stairsneach na h-uinneige, tha an loidhne stairsneach anns an ìre logaritmach, agus tha lùb leudachaidh an smachd àicheil na loidhne dhìreach no fo loidhne na stairsneach).

6 Smachd càileachd (Tha smachd modh-obrach air a ghabhail a-steach san deuchainn) Smachd àicheil: Gun lùb leudachaidh follaiseach airson seanalan lorg FAM, HEX, CY5

Smachd dearbhach COV: lùb leudachaidh follaiseach de shianalan lorg FAM agus HEX, luach Ct ≤32, ach gun lùb leudachaidh de shianal CY5;

Feumar na riatanasan gu h-àrd a choileanadh aig an aon àm san aon deuchainn; air neo, tha an deuchainn neo-dhligheach agus feumar a h-ath-aithris.

7 Co-dhùnadh nan toraidhean.

7.1 Mura h-eil lùb leudachaidh no luach Ct> 40 ann an seanalan FAM agus HEX an t-sampall deuchainn, agus ma tha lùb leudachaidh ann an seanal CY5, faodar a bhreithneachadh nach eil RNA coronavirus ùr 2019 (2019-nCoV) anns an sampall;

.2 Ma tha lùban leudachaidh follaiseach anns na seanalan FAM agus HEX aig an sampall deuchainn, agus ma tha an luach Ct ≤40, faodar a bhreithneachadh gu bheil an sampall deimhinneach airson a’ choròna-bhìorais ùr 2019 (2019-nCoV).

7.3 Ma tha lùb leudachaidh soilleir aig an sampall deuchainn ann an aon seanail de FAM no HEX a-mhàin, agus ma tha an luach Ct ≤40, agus mura h-eil lùb leudachaidh anns an t-sianal eile, feumar na toraidhean ath-dhearbhadh. Ma tha na toraidhean ath-dheuchainn cunbhalach, faodar breithneachadh gu bheil an sampall deimhinneach airson an t-sianail ùr.

coronavirus 2019 (2019-nCoV). Ma tha toradh an ath-dheuchainn àicheil, faodar a bhreithneachadh gu bheil an sampall àicheil airson coronavirus ùr 2019 (2019-nCoV).

Luach breithneachaidh adhartach

Tha modh lùb ROC air a chleachdadh gus luach CT iomraidh a’ phasgan a dhearbhadh agus is e 40 luach iomraidh an smachd a-staigh.

Mìneachadh thoraidhean deuchainn

1. Bu chòir gach deuchainn a dhearbhadh airson smachdan àicheil is dearbhach. Chan urrainnear toraidhean deuchainn a dhearbhadh ach nuair a choinnicheas smachdan ri riatanasan smachd càileachd.
2. Nuair a bhios na seanalan lorg FAM agus HEX deimhinneach, is dòcha gum bi an toradh bhon t-sianal CY5 (sianal smachd a-staigh) àicheil air sgàth farpais an t-siostaim.
3. Nuair a bhios toradh an smachd a-staigh àicheil, ma bhios seanalan lorg FAM agus HEX an tiùba deuchainn àicheil cuideachd, tha sin a’ ciallachadh gu bheil an siostam air a dhì-chomasachadh no gu bheil an obrachadh ceàrr, tha an deuchainn neo-dhligheach. Mar sin, feumar na sampallan ath-dhearbhadh.


  • Roimhe:
  • Air adhart:

  • Sgrìobh do theachdaireachd an seo agus cuir thugainn i